⑴固定相選擇
柱色譜中提到的吸附劑都可以用作為薄層色譜的固定相，分離性能及使用選擇同柱色譜的選擇原則相同(各種吸附劑見(jiàn)柱色譜表1)。
一般用于薄層色譜時(shí)，要求吸附劑的粒度更小。商品吸附劑區(qū)分為色譜級(jí)(用于柱色譜)和薄層色譜級(jí)(用于薄層色譜)。
⑵展開劑選擇
薄層色譜展開劑的選擇和柱色譜一樣，主要根據(jù)樣品中各組分的極性、溶劑對(duì)于樣品中各組分溶解度等因素來(lái)考慮。展開劑的極性越大，對(duì)化合物的洗脫力也越大。(各種溶劑極性見(jiàn)柱色譜表2)。
選擇展開劑時(shí)，除參照表列溶劑極性來(lái)選擇外，更多地采用試驗(yàn)的方法，在一塊薄層板上進(jìn)行試驗(yàn)：
①若所選展開劑使混合物中所有的組分點(diǎn)都移到了溶劑前沿，此溶劑的極性過(guò)強(qiáng)；
②若所選展開劑幾乎不能使混合物中的組分點(diǎn)移動(dòng)，留在了原點(diǎn)上，此溶劑的極性過(guò)弱。
當(dāng)一種溶劑不能很好地展開各組分時(shí)，常選擇用混合溶劑作為展開劑。先用一種極性較小的溶劑為基礎(chǔ)溶劑展開混合物，若展開不好，用極性較大的溶劑與前一溶劑混合，調(diào)整極性，再次試驗(yàn)，直到選出合適的展開劑組合。合適的混合展開劑常需多次仔細(xì)選擇才能確定。
⑶相對(duì)移動(dòng)值
從點(diǎn)樣原點(diǎn)開始到展開后的溶劑前沿，是溶劑的移動(dòng)距離，記為lo，混合物中各組分的移動(dòng)距離分別記為l1，l2，l3 …(移動(dòng)值示意圖)。
在不同的展開條件下，各化合物的移動(dòng)距離不會(huì)相同，而在同一條件下，相對(duì)于展開劑的移動(dòng)距離，各化合物有可比較的展開數(shù)據(jù)，稱為相對(duì)移動(dòng)值，或比移值：
Rf=li/lo
在相同條件下測(cè)得的比移值可以用于化合物的薄層色譜特征值進(jìn)行比較對(duì)照。
⑷顯色
分離的化合物若有顏色，很容易識(shí)別出來(lái)各個(gè)樣點(diǎn)。但多數(shù)情況下化合物沒(méi)有顏色，要識(shí)別樣點(diǎn)，必須使樣點(diǎn)顯色。通用的顯色方法有碘蒸氣顯色和紫外線顯色。
①碘蒸氣顯色：將展開的薄層板揮發(fā)干展開劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產(chǎn)生的碘蒸氣能與有機(jī)物分子形成有色的締合物，完成顯色。
②紫外線顯色：用摻有熒光劑的固定相材料(如硅膠F，氧化鋁F等)制板，展開后在用紫外線照射展開的干燥薄層板，板上的有機(jī)物會(huì)吸收紫外線，在板上出現(xiàn)相應(yīng)的色點(diǎn)，可以被觀察到。
有時(shí)對(duì)于特殊有機(jī)物使用專用的顯色劑顯色。此時(shí)常用盛有顯色劑溶液的噴霧器噴板顯色。
